为了完善仿制药注册申请的技术标准，我中心在前期调研、组织专家及相关企业专题研讨会的基础上，参考各国监管机构相关的技术要求并结合中国药典及国内仿制药研发与生产现状，组织起草了《低分子量肝素类仿制药免疫原性基本技术要求（征求意见稿）》，拟为低分子量肝素类仿制药的研发、申报、上市后变更和一致性评价提供技术参考，现向社会各界公开征求意见。
如您有任何意见和建议，请在征求意见反馈表填写具体信息，并通过邮件反馈我们。感谢您的参与和支持！
联系人：石靖 米贤伟
邮箱：shij@cde.org.cn mixw@cde.org.cn
征求意见截止时间：自公布之日起1个月。
国家药品监督管理局药品审评中心
2020年9月15日
低分子量肝素类仿制药免疫原性研究基本技术要求
（征求意见稿）
目录
低分子量肝素（low-molecular-weight heparins，LMWHs）是以猪肠黏膜来源的肝素为原料，采用不同的解聚方法制得的，由未被完全定性的一系列复杂寡糖组成的混合物。LMWHs是临床上重要的抗凝药物，它主要通过抑制凝血因子FXa发挥预防和治疗血栓的作用。
临床使用中，肝素和LMWHs均存在发生肝素诱导的血小板减少症（heparin-induced thrombocytopenia，HIT）的风险。当机体针对肝素-血小板因子4（platelet factor 4, PF4）复合物或LMWHs-PF4复合物产生抗体时，可能引发不可逆的血小板聚集、减少，甚至是血栓形成（heparin-induced thrombocytopenia and thrombosis, HITT），这将严重威胁患者生命安全。数据显示，经依诺肝素和肝素钠治疗的患者发生HIT的风险分别为0.2％和2%~3％。尽管LMWHs的HIT发生率相对较低，但潜在后果严重，同时由于LMWHs可以在门诊患者中使用，因此对LMWHs产品免疫原性风险的评估和管理非常重要。
本技术要求在国内外指导原则和技术文献的基础上，重点讨论LMWHs免疫原性评估需要考虑的主要内容，并推荐一些研究方法；旨在为LMWHs仿制产品的开发研究，以及可能影响该类产品免疫原性的上市后变更研究提供技术参考，促进现阶段仿制产品研究和评价工作的开展。
本技术要求的起草是基于对该问题的当前认知，随着相关法规的不断完善以及药物研究的深入，将不断修订并完善。
仿制品与参比制剂中活性成分（API）应具有相似的理化性质、生物学活性和药效学特征。在此情况下，可以一定程度上预测，在与药理作用放大相关的不良反应（例如出血）的发生频率方面，仿制品和参比制剂具有相似性。因此，证明仿制品与参比制剂活性成分的相似性对于评估免疫原性风险至关重要，相应的对比研究应包括如下内容：
1. 所用肝素钠原料应以新鲜猪小肠为起始物料， 肝素钠原料药的质量标准应符合中国药典，肝素钠的解聚模式应与原研产品一致。
2. 理化性质的对比研究。
3. 双糖结构单元、寡糖片段分布和寡糖序列的对比研究。
4. 体外生物学和生物化学活性的对比研究。
5. 人体药效学等效性研究。
LMWHs中的杂质可能作为免疫激动剂或通过影响LMWHs与PF4的相互作用等方式增强LMWHs的免疫原性。杂质包括肝素中存在的天然杂质（包括残留蛋白、核酸、脂质等）和工艺相关杂质。这些杂质有些是结构已知的，或部分确定的，也有些是未知的。由于杂质的存在可能会改变免疫系统对LMWHs或LMWHs-PF4复合物的识别、摄取、加工或递呈，应通过研究证明仿制品中不含这些杂质，或与参比制剂的杂质水平相近。所采用的研究方法应进行适用性评估，并需要进行方法验证。
为评估LMWHs中的相关杂质，推荐开展如下研究：（1）LMWHs、肝素及其他原料中潜在杂质的研究；（2）生产工艺去除杂质能力的评估和研究；（3）仿制品与参比制剂中杂质种类和含量的对比研究；（4）效期内产品的包材提取物和浸出物的研究。
机体针对LMWHs-PF4复合物会产生特异性抗体，该抗体介导了HIT的发生，因此，在LMWHs的免疫原性研究中，应充分评估LMWHs与PF4之间的结合活性，以及所形成的LMWHs-PF4复合物大小和电荷水平。推荐的研究方法包括：表面等离子共振，尺寸排阻色谱，多角度光散射分析，圆二色谱分析，光子相关谱、分析超速离心，场流分级分离，原子力显微镜等，并应与参比制剂进行比较。所采用的研究方法应进行适用性评估，并经过合理的方法学验证。
此外， LWMHs与PF4所形成复合物的特性可能会受到PF4本身特性，以及两种组分比例和浓度的影响。因此，相关研究应在LWMHs与PF4不同的比例和浓度条件下展开。
作为上述分析方法的补充，建议探索一些评估免疫激活的体外试验来评估仿制品与参比制剂的免疫原性的可比性。例如，树突状细胞激活试验、采用HIT患者血清进行的LMWHs特异性抗体结合试验、评估血小板激活的五羟色胺释放试验等。所选择的试验方法应具备充分的敏感性，能够识别仿制产品与参比制剂的分子结构或杂质谱的差异，方法的适用性应经过充分验证，并在试验中设置合适的阳性对照。
鉴于LMWHs的结构复杂性，上述试验选择的仿制品和参比制剂均需要有足够的批次，并要求包括新生产、效期中和效期末等不同情况的样品，同时包括人体药效学等效性试验样品。仿制品还应包括由不同批次肝素生产的样品，以保证所获数据结果的代表性和统计学意义。
如果经评估，仿制品的性质、所含杂质和赋形剂的性质不会带来免疫原性的风险或不确定性，并且开展了适当的非临床免疫原性探索性研究，也未发现免疫原性风险，可不进行专门的免疫原性临床研究。否则，应在上市前提供患者的免疫原性比较研究的数据。
产品上市后，应针对已知和潜在的安全性风险制定风险控制计划，监测低分子肝素相关的严重不良反应例如HIT和HITT，以及类过敏反应和过敏反应，并在再注册时提供安全性报告。
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附件：《低分子量肝素类仿制药免疫原性基本技术要求（征求意见稿）》